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【課程大綱】

GB4789.3-2016大腸菌群平板計數(shù)法細節(jié)解讀-圣問技術職業(yè)技能培訓中心V：stspx134
一、無需高壓滅菌的VRBA培養(yǎng)基配制使用問題

1.所用器皿是否需要滅菌？

答：不需要。配制培養(yǎng)基所用到的錐形瓶、玻璃棒、勺子等均不需要滅菌，但要求一定要清洗干凈，表面無污漬、無殘留，且晾干無水漬。煮沸完成后，取下錐形瓶，用一般用錫箔紙覆蓋瓶口，用橡皮筋纏繞，待冷卻至適宜溫度即可傾注培養(yǎng)基。在傾注培養(yǎng)基時，須點燃酒精燈，稍微灼燒錐形瓶口。

2.如何保持培養(yǎng)基"煮沸2min"？

答：培養(yǎng)基加熱煮沸至完全溶解一般采用電陶爐或電熱爐進行，但培養(yǎng)基很難保持煮沸2min，一旦煮沸，則培養(yǎng)基很快上涌、翻騰，若不調(diào)低溫度或立刻采取其他措施，則培養(yǎng)基可在數(shù)秒內(nèi)噴涌出來，嚴重者可噴涌2米以上、電磁爐周圍1—2米范圍內(nèi)都是培養(yǎng)基飛濺的范圍（實驗室危險因子之一）。因此，要做到"煮沸2min"，則需在該培養(yǎng)基即將煮沸時調(diào)低溫度，待培養(yǎng)基一沸騰就馬上移離熱源，待培養(yǎng)基停止沸騰后，又繼續(xù)加熱至沸騰狀態(tài)又移開，這樣間歇性煮沸2min。（注意規(guī)范操作，做好防燙措施，避免燙傷）

3.若培養(yǎng)基未用完，是否可以冷藏起來下次用？

答：不可以。4789.28中已規(guī)定，固體培養(yǎng)基最多允許熔融1次（指的是經(jīng)過高壓滅菌冷卻后的培養(yǎng)基還可以熔融一次后使用）。且VRBA培養(yǎng)基冷卻后，再次熔融時非常容易噴涌，若溫度控制不當，底部培養(yǎng)基熔融后很快就會發(fā)生噴涌。

4.傾注完成后是否需要"覆蓋一層"？如何覆蓋？

答：需要覆蓋。因為培養(yǎng)基冷卻后在表面容易形成一些冷凝水，菌落容易蔓延開，所以在傾注完成后，再覆蓋一層培養(yǎng)基，則菌落不容易接觸到水，這樣不易形成蔓延菌落。在檢驗中最好都進行覆蓋，最好是在原培養(yǎng)基已凝固或半凝固（不會發(fā)生晃動）時再傾注一層培養(yǎng)基（"一層"是指緩慢傾注培養(yǎng)基至培養(yǎng)基剛好能夠覆蓋整個平皿）。

二、如何確定培養(yǎng)基上長的是不是大腸菌群？

答：不要去管什么是大腸菌群的典型形態(tài)，建議新手們認真按照標準進行證實試驗，此證實試驗非常簡單，每一次VRBA上有菌落生長都進行證實試驗，如此往復3-4次，對于哪種形態(tài)才是大腸菌群已經(jīng)能夠了然于心了。建議平時多配一些BGLB肉湯管冷藏儲存?zhèn)溆�，需要進行證實試驗時分分鐘可以完成試驗。

三、兩個梯度都長了菌，如何選��？如何進行證實試驗？菌落選取數(shù)量？

答：選取15-150CFU之間的平板（指的是VRBA平板上所有菌落數(shù)在此范圍），挑取可疑菌落進行證實試驗。詳細舉例說明：若有兩個連續(xù)梯度的4個平板上菌落數(shù)均在15-150之間，則4個平板上的菌落都要挑取進行證實試驗，實際操作時，可靈活操作，如：1:10的兩個平板上的菌落數(shù)分別為120、123，1:100的兩個平板的菌落數(shù)分別為16、18，嚴格來講必須至少在每個平板上分別挑取5個可疑菌落、5個典型菌落進行證實試驗。建議使用鎳合金接種環(huán)（即傳統(tǒng)的接種環(huán)，而不是一次性塑料接種環(huán)），因為VRBA上生長的菌落（無論典型或可疑）大部分長在底層、且菌落一般較大，被培養(yǎng)基覆蓋，傳統(tǒng)的接種環(huán)較細，用以刮去上層培養(yǎng)基較方便，挑取菌落也較方便。

確證試驗注意：1）.每種可疑菌落挑取5個，每個菌落放入1管GBLB管中；2）"產(chǎn)氣者，記為大腸菌群陽性管"，就要求在實驗前須認真篩選BGLB管，凡小導管中有氣泡的GBLB管應先排去導管中的氣泡再使用。

BGLB確證陽性結果

四、結果如何計算？

答：首先，在VRBA培養(yǎng)24h后進行計數(shù)，分別計數(shù)可疑大腸菌群和典型大腸菌群的數(shù)量。例：10-4樣品稀釋液1mL，在VRBA平板上有100個典型和可疑菌落，挑取其中10個接種BGLB肉湯管，證實有6個陽性管，則該樣品的大腸菌群數(shù)為：100X6/10X104/g（mL）=6.0X105 CFU/g（mL）。若所有稀釋度（包括液體樣品原液）平板均無菌落生長，則以小于1乘以最低稀釋倍數(shù)計算。

五、若所選適合計數(shù)梯度平板上可疑和典型菌落，最終證實全部為陰性，結果如何計算？

答：根據(jù)第3條,選取適宜菌落數(shù)的平板挑取菌落進行證實試驗，若證實全部為陰性，則需要再挑取更低稀釋度的平板上的菌落（建議可疑和典型菌落分別挑取10個）進行證實試驗，若第二次證實試驗均呈陰性，以＜1乘以最低稀釋度進行計算，如：1:10的平板菌落數(shù)分別為120、123，1:100的平板上菌落數(shù)分別為16、18，首先挑取1:100的兩個平板上的菌落進行證實試驗，若全部為陰性，再挑取1:10的兩個平板上的菌落進行證實試驗，若1:10的平板上的菌落數(shù)證實為陰性，則最終計算過程為＜1x10，最終結果為＜10；若1:10的的平板上的菌落有陽性管，則按照第5條進行計算。

【講師介紹】

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一、食品檢驗員培訓對象：

  企業(yè)主管食品質(zhì)量、安全標準及監(jiān)督管理工作崗位的人員、食品生產(chǎn)企業(yè)、經(jīng)銷單位、質(zhì)量監(jiān)督部門、食品衛(wèi)生檢驗部門及有關科研、管理部門的管理人員、技術人員和檢驗人員;單位中從事從事農(nóng)副產(chǎn)品生產(chǎn)加工、糧油及制品、餐飲、糕點糖果、乳及乳制品、白酒果酒黃酒、啤酒、飲料、罐頭、肉類及制品、調(diào)味品醬貨腌制品、茶葉、食品及食品內(nèi)包裝材料、容器、洗滌劑、消毒劑和用以食品生產(chǎn)經(jīng)營的工具、設備的生產(chǎn)經(jīng)營崗位，用抽樣檢查方式對各類食品的成分、添加劑、農(nóng)殘、及衛(wèi)生、毒性、微生物等指標進行測試檢驗的人員;各類食品、化學專業(yè)院校的在校學生。

  二、食品化驗員培訓內(nèi)容：

  按照國家標準大綱制定的要求對食品檢驗初級、中級、高級技術人員必須掌握的基礎知識和專業(yè)知識,檢驗技術及檢驗操作技能，食品行業(yè)的基本的法律法規(guī)等主要內(nèi)容包括：

  食品檢驗的感官檢驗技術 食品檢驗的化學基礎 實際操作技能培訓食品專業(yè)分析與檢驗技術 化學分析與檢驗技術 儀器分析與檢驗技術食品檢驗的微生物檢驗技術 誤差分析與數(shù)據(jù)處理 食品檢驗概述

  三、食品檢驗工培訓目的：

  通過學習使學員檢驗水平能達到國家職業(yè)技能鑒定大綱要求，掌握基本的理論和專業(yè)知識，按著國家勞動和社會保障部規(guī)定的食品檢驗初級、中級、高級職業(yè)資格要求，取得相應級別的職業(yè)資格證書，并能持證獨立上崗操作。

  參考文件

  《中華人民共和國食品安全法》

  《中華人民共和國食品安全法實施條例》

  《中華人民共和國認可條例》

  《食品檢驗機構資質(zhì)認定管理辦法》

  《實驗室資質(zhì)認定評審準則》

  《食品檢驗機構資質(zhì)認定條件》

  隨時可報名(具體地點留意通知函信息指引，;包括從事糧油及制品、糕點糖果、乳及乳制品、白酒果酒黃酒、啤酒、飲料、罐頭、肉蛋及制品、調(diào)味品醬貨腌制品、茶葉、食品添加劑及食品內(nèi)包裝材料等崗位，用抽樣檢查方式對各類食品的成分及衛(wèi)生、毒性等指標進行測試檢驗的人員。

  從事的工作主要包括：(1)采集樣品;(2)配制標準溶液;(3)使用培養(yǎng)箱、顯微鏡等儀器設備檢驗樣品的微生物含量;(4)檢驗樣品的微量金屬元素、微量非金屬元素及理化指標(5)記錄、計算、判定檢驗數(shù)據(jù);(6)協(xié)助主檢人員完成檢驗報告;(7)檢查、維護儀器設備;(8)負責檢驗室衛(wèi)生、安全工作。

【培訓對象】

廣州、上海、北京、天津、重慶、深圳、南京、杭州、福州、濟南、合肥、鄭州、西安化學檢驗員職業(yè)資格證書報考條件?宜賓、瀘州、樂山、雅安、廣元、達州、南充、綿陽、汶川、攀枝花、成都、遵義、三穗、畢節(jié)、都勻、貴陽、南寧、曲靖、保山、大理、思茅、香格里拉、石林、開遠、昆明、三亞、�？�、衡陽、邵陽、永州、郴州、岳陽、株洲、湘潭、懷化、常德、張家界、長沙化驗員證書考試地址?承德、唐山、秦皇島、滄州、石家莊、沈陽、西寧、太原、呼和浩特、大連、青島、寧波、廈門、蘇州、南通、無錫、泰州、鎮(zhèn)江、揚州、鹽城、徐州、淮安、連云港、常州化學檢驗工資格證書報考條件?宜蕪湖、安慶、蚌埠、亳州、黃山、溫州、嘉興、紹興、湖州、金華、衢州、麗水、舟山、臺州、漳州、寧德、莆田、南平、三明、龍巖、泉州、微生物檢驗員考試地址?昌、荊州、襄樊、十堰、恩施、武漢、新干、萍鄉(xiāng)、景德鎮(zhèn)、鷹潭、泰和、瑞金、贛州、九江、南昌、邯鄲、保定、張家口、濰坊、煙臺、威海、日照、臨沂、濟寧、菏澤、濱州、德州、淄博、洛陽、新鄉(xiāng)、許昌、漯河、平頂山、信陽、周口、駐馬店、南陽、三門峽、濟源、焦作、安陽、開封化學檢驗員考試時間?東莞、中山、珠海、清遠、汕頭、汕尾、潮州、揭陽、河源、梅州、茂名、云浮、湛江、惠州、江門、肇慶、柳州、防城港、北海、賀州、桂林、欽州、梧州、玉林化妝品化驗員培訓地址?】等各地均有開辦)

更新時間：2022/11/9 22:02:34